1 實驗部分

 1. 1 儀器與試劑

 X-4 型數(shù)字顯微熔點測定儀( 北京泰克儀器 有 限 公 司 ) ，溫 度 未 校 正; JEOL-ECX500 型 500MHz 核 磁 共 振 譜 儀 ( 日本電子株式會社) ， TMS 為內(nèi)標; LC-MS 1100 /MSD 液質(zhì)聯(lián)用儀( 美國 Agilent 公司) ; Elementar Vario-Ⅲ型元素分析儀 ( 德國 Elementar 公司) ; SPX-2508B-Z 生化培養(yǎng)箱 ( 上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠) ; SW-CJ-1G 超凈工作臺( 蘇州凈化設備有限公司) 。所用試 劑均為市售分析純。 

1. 2 合成

1、2 和 3 的合成 3，4，5-三甲氧 基苯甲酸甲酯( 1) 、3，4，5-三甲氧基苯甲酰肼( 2) 和 5-( 3，4，5-三甲氧基苯基) -4H-1，2，4-三唑-3-硫 醇( 3) 的合成參照的方法。 1. 2. 2 2-( ( 5-( 3，4，5-三甲氧基苯基) -4H-1，2，4- 三唑-3-基) 硫) 乙 酸 乙 酯 ( 4 ) 的 合 成 稱 取 13. 35g( 50mmol) 化合物 3 和 80mL 蒸餾水置于 250mL 三口燒瓶中，加入 3. 0g ( 75mmol) NaOH， 于室 溫 下 攪 拌 至 溶 液 澄 清。隨 后，逐 滴 加 入8. 25g( 55mmol) 溴乙酸乙酯。滴加完畢，于室溫 下反應 5h，TLC 監(jiān)測反應。待原料反應完全，停 止攪拌，抽濾，烘干，得白色粉末狀固體，用乙醇重 結晶得到白色固體，產(chǎn) 率 85. 3%，熔 點 109 ～ 111℃ ; 1 H NMＲ ( 500MHz，DMSO-d6 ) δ: 14. 41( s， 1H，NH) ，7. 27( s，2H，Ph-H) ，4. 13( q，J = 7. 0Hz， 2H，CH2-) ，4. 03 ( s，2H，CH2-) ，3. 85 ( s，6H， CH3O-) ，3. 72( s，3H，CH3O-) ，1. 19( t，J = 6. 9Hz， 3H，CH3-) ; 13 C NMＲ ( 126MHz，DMSO-d6 ) δ: 169. 3，159. 2，155. 8，153. 8，139. 7，132. 0，129. 1， 122. 4，104. 0，61. 4，60. 6，56. 5，33. 8，14. 5。1. 2. 3 2-( ( 5-( 3，4，5-三甲氧基苯基) -4H-1，2，4- 三唑-3-基) 硫) 乙 酸 ( 5 ) 的 合 成 稱 取 14. 2g ( 40mmol) 化合物 4 和 3. 36g( 60mmol) KOH 置于 250mL 三口燒瓶中，加入 150mL 蒸餾水，回流 3h。 冷卻至室溫，過濾除去不溶物，收集濾液，用 10% HCl 調(diào)節(jié) pH 至 4 ～ 5，生成大量白色固體，抽濾， 烘干，得白色粗產(chǎn)物，用乙醇重結晶得到白色固 體，產(chǎn) 率 92. 5%，熔 點 151 ～ 152℃ ; 1 H NMＲ ( 500MHz，DMSO-d6 ) δ: 14. 38( s，1H，NH) ，12. 84 ( brs，1H，COOH) ，7. 27 ( s，2H，Ph-H) ，4. 00 ( s， 2H，CH2-) ，3. 85 ( s，6H，CH3O-) ，3. 72 ( s，3H，CH3O-) ; 13C NMＲ ( 126MHz，DMSO-d6 ) δ: 170. 5， 159. 5，155. 8，153. 7，139. 5，122. 5，103. 9，60. 6， 56. 5，34. 3。

1. 3 抗獼猴桃軟腐病的抑菌活性測試

采用抑制菌絲生長速率法測定目標化 合物 6a ～ 6m 的體外抑菌活性。在藥劑濃度為 50μg /mL 時，以獼猴桃軟腐病中的葡萄座腔菌、 擬莖點霉菌和灰霉菌為測試菌種，在馬鈴薯葡萄 糖瓊脂培養(yǎng)基( PDA) 上測試目標化合物 6a ～ 6m 抑菌活性，以商品藥劑嘧霉胺為對照藥劑。

2 結果與討論

2. 1 目標化合物的合成及表征

中間體及目標化合物的合成路線如圖式 1 所 示。以 3，4，5-三甲氧基苯甲酸、氨基硫脲為原料， 經(jīng)縮合、環(huán)化等反應得到中間體 3; 中間體 3 與溴 乙酸乙酯在堿性條件下反應得到中間體 4，進一 步水解得到中間體 5; 中間體 5 與脂肪胺在 EDCI 和 HOBT 存在的條件下進行縮合得到目標化合物 6a ～ 6m。 在1 H NMＲ 譜圖中，苯環(huán)上氫的化學位移在 8. 27 ～ 8. 28 處有一組單峰，與巰基相連的-CH2-的 化學位移在 3. 85 ～ 4. 25 處有一組單峰，苯環(huán)上 3 個 CH3O 的化學位移在 3. 85 和 3. 71 處出現(xiàn) 2 組 單峰。在 ESI-MS 譜圖中，所有目標化合物均顯示 出較強的［M+H］+ 或［M+Na］+ 峰) 。

2. 2 目標化合物抑菌活性測試

采用抑制菌絲生長速率法，以商品藥劑嘧霉 胺為對照，在藥劑濃度 50μg /mL 時測試了目標化 合物 6a ～ 6m 對獼猴桃軟腐病中的葡萄座腔菌、 擬莖點霉菌和灰霉菌等三株菌的體外抑菌活性， 結果見表 1。化合物 6a ～ 6m 對葡萄座腔菌、擬莖 點霉菌和灰霉菌都表現(xiàn)出一定抑制活性。目標化 合物對葡萄座腔菌的抑制率在 28. 4% ～ 89. 3%之 間，其中，化合物 6k 和 6l 的抑制率為 85. 3%和 89. 6%，與對照藥嘧霉胺的抑制活性相當; 化合物 6a ～ 6m 對擬莖點霉菌的抑制率在 31. 8% ～ 91. 3%，其中，化合物 6c、6d、6h 和 6k 的抑制率均 在 81. 7% ～ 87. 8%，化合物 6l 對擬莖點霉菌的抑 制率為 91. 3%，活性優(yōu)于對照藥嘧霉胺; 化合物 6a ～ 6m 對灰霉菌的抑制率在 45. 7% ～ 85. 3%，其 中，化合物 6d、6h、6k 和 6l 的抑制率均在 80. 8% ～ 85. 8%，與對照藥嘧霉胺的活性相當。

3 結論

為尋找具有高活性的農(nóng)藥化合物，以 3，4，5- 三甲氧基苯甲酸為原料，經(jīng)過酯化、肼解、環(huán)化、醚 化、水解、縮合等步驟合成了 13 個三唑硫基乙酰 胺類化合物。初步生物活性測試結果表明，大部 分目標化合物對獼猴桃軟腐病中的葡萄座腔菌、 擬莖點霉菌和灰霉菌具有較好的抑制活性。其中 化合物 6k 和 6l 對葡萄座腔菌、擬莖點霉菌和灰 霉菌的抑制活性在 83. 4% ～ 91. 3%，化合物 6k 對 葡萄座腔菌和擬莖點霉菌的 EC50 值為 46. 6 和 30. 8 μg /mL，均優(yōu)于對照藥劑嘧霉胺。該系列化 合物均對獼猴桃軟腐病中的葡萄座腔菌、擬莖點 霉菌和灰霉菌具有一定抑菌活性，在此基礎上進 一步對其進行結構修飾和優(yōu)化，有望獲得較高生 物活性的農(nóng)藥小分子。

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