貴州省是全國四大中藥產區之一，醫藥產業也是其特 色優勢項目，故保證微生物限度檢查方法的完整性與可 靠性，是保障當地藥品安全的重要組成部分。同名異型中 成藥是指名稱相同、劑型不同的中成藥，貴州省食品藥 品檢驗所近年來相關研究涉及到 7 組該類型，有的是同一 藥企產品，有的為不同藥企生產。包擴獨家品種民族藥、 醫院制劑，劑型涉及到丸劑、膠囊、片劑、顆粒劑、洗劑、 搽劑。現就上述藥品微生物限度檢查方法適用性研究過程 及結果進行分析。

1 材料

1. 1 樣品

7 組樣品共涉及 8 家生產企業，具體如下。 第 1 組: 日 舒 安 濕 巾 ( 批 號 5076001、5076002、 5076003 ) 、 日 舒 安 洗 液 ( 批 號 4066049、 4066080、 4066110) ，貴州漢方藥業有限公司。 第 2 組: 婦 科 再 造 膠 囊 ( 批 號 1512003、2026008、 2026012) ，貴州漢方藥業有限公司; 婦 科 再 造 丸 ( 批 號 11717053、11717054、11717062) ，貴州德昌祥藥業有限公司。 第 3 組: 六味地黃膠囊 ( 批號 20170102、20170103、 20170104) ，貴州圣濟堂制藥有限公司; 六味地黃丸 ( 批號 DCXA0401、DCXA0421、DCXA0532) ，貴州德昌祥藥業有 限公司。 第 4 組: 糖寧通絡膠囊 ( 批號 20170601、20170901、 20171001) 、 糖 寧 通 絡 片 ( 批 號 20160401、20161201、 20170901) ，貴州百靈企業集團制藥股份有限公司。 第 5 組: 復方天麻顆粒 ( 批號 20170914、20170406、 20170710) ，貴州科輝制藥有限責任公司; 復方天麻片 ( 批 號 20161003、20170301、20170702) ，貴州百靈企業集團制 藥股份有限公司。 第 6 組: 枇 杷 止 咳 顆 粒 ( 批 號 180313、180314、180315) 、枇杷止咳膠囊 ( 批號 180402、180403、180404) ， 貴州神奇藥業有限公司。 第 7 組: 護 肝 寧 片 ( 批 號 20180104、 20180201、 20180203) ，貴州信邦制藥股份有限公司; 護肝寧膠囊 ( 批 號 20160385、20180386、20160387) ，貴州益佰制藥股份有 限公司。 其中，第 1、2 組為獨家品種，第 4 組為醫院制劑。

1. 2 菌種

黑曲霉 ［CMCC ( F) 98003］、枯草芽孢桿菌 ［CMCC ( B) 63501］、白色念珠菌 ［CMCC ( F) 98001］、 金黃色 葡 萄 球 菌 ［CMCC ( B) 26003］、銅 綠 假 單 胞 菌 ［CMCC ( B) 10104］、生孢梭菌 ［CMCC ( B) 64941］、大 腸埃 希 菌 ［CMCC ( B) 44102］、乙 型 副 傷 寒 沙 門 菌 ［CMCC ( B) 50094］，均由中國食品藥品檢定研究院提供。

1. 3 試劑與培養基

吐溫-80 ( 成都金山化學試劑，批號 20170606) 。梭菌增菌培養基 ( 批號 17070161) 、哥倫比亞 瓊脂培養基 ( 批號 1707171) 、胰酪大豆胨液體培養基 TSB ( 批號 18030965) 、胰酪大豆胨瓊脂培養基 TSA ( 批 號 18042762 ) 、 紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養基 ( 批 號 17061281) 、溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基基礎 ( 批號 1512232) 、沙氏葡萄糖瓊脂培養基 SDA ( 批號 18010864) 、 沙氏葡萄糖液體培養基 SDB ( 批號 18073161) 、腸道增菌 培養基 ( 批號 1609072) 、甘露醇氯化鈉瓊脂培養基 ( 批號 1610083) 、麥康凱液體培養基 ( 批號 1703139) 、麥康凱瓊 脂培養基 ( 批號 1604055) 、木糖賴氨酸脫氧膽酸瓊脂 ( 批 號 17050483) ，均購于北京陸橋技術股份有限公司; ＲV 沙 門菌增菌液體培養基 ( 批號 3303081) ，購于廣東環凱微生 物科技有限公司。

1. 4 儀器

生物安全柜 ( 美國 NuAire 實驗設備公司，型 號 NU-425-400E) ; 低溫恒溫培養箱 ( 型號 KB240) 、電熱恒溫培養箱 ( 型號 BF240) ( 德國賓德公司) ; 博迅BXM-30R立式壓力蒸汽滅菌器［上海博迅提供］; 電子天平 ( 梅特勒－托利多國際有限公司，型 號 ME2002) 。

2 方法與結果

2. 1 供試液制備

按 2015 年版 《中國藥典》四部通則 1105要求進行制備。其中，日舒安洗液、咳速停糖漿取 樣量為 10 mL，日舒安濕巾取樣量為 100 cm2 ，其余品種取 樣量為 10 g，分別加 TSB 至 100 mL，制成 1 ∶ 10 供試液， 再據品種實際情況選擇合適稀釋倍數進行預試驗。

2. 2 菌 液 制 備

按 2015 年 版 《中 國 藥 典》 四 部 通 則 1105、1106要求進行制備。

2. 3 回收比值計算

計數方法適用性試驗中，回收比值 = ( 試驗組菌落數－供試品對照組菌落數) /菌液對照組菌落數，添加中和劑組的中和劑回收比值 = ( 中和劑對照組 菌落數－供試品對照組菌落數) /菌液對照組菌落數。2015 年版 《中國藥典》 規定，回收比值應在 0. 5 ～ 2 之 間，本實驗將其下限提升至 0. 7 左右，以保證該方法在之 后日常檢驗中重復性更佳。

2. 4 計數方法適用性試驗

2. 4. 1 分組

試驗組，按要求在供試液加入 “2. 2”項下 菌液，使每 1 mL 供試液中的加菌量不大于 100 cfu，混勻; 供試品對照組，取供試液，以 TSB 代替菌液，其他同試驗 組; 菌液對照組，取 TSB 替代供試液，其他同試驗組; 中 和劑對照組，取含 1%吐溫－80 的 TSB 代替供試液，其他同 試驗組。以上 4 組均取 1 mL 混合液，置于 90 mm 培養皿 中，需氧菌總數計數對應組加入 20 mL TSA 培養基，霉菌、 酵母菌計數對應組加入 20 mL SDA 培養基，分別放至 34、 23 ℃培養箱中培養 3、5 d，計數記錄。

2. 4. 2 預試驗

據藥品品種成分及企業反饋信息，分 別在合適稀釋倍數下選擇各品種對應的敏感菌株進行預試 驗，結果見表 1。

3 討論

方法適用性試驗的本質是建立對樣品影響更小、操作 得率更高的方法，但其本身工作量大，而且存在不同實 驗室方法欠佳、重復勞動過多的問題，去除藥品抑菌性 是其中的重點和難點。因此，本實驗在研究前對樣品組 分抑菌性進行分析以確定預試驗菌株，再根據藥典對不同 給藥途徑的限度規定，確定最終的計數方法; 對控制菌檢 查法，主要結合給藥途徑、是否含藥材原粉 2 個方面來開展研究，能有效提高方法適用性試驗的效率。