阿爾茨海默病俗 稱早老性癡呆癥，是發(fā)生于老年和老年前期以進 行性神經(jīng)退化為特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變行性疾 病，是大腦退行性病變，其主要臨床表現(xiàn)為認知功 能減退并伴有行為障礙和情緒異常等，嚴重者甚 至失去生活自理能力。隨著 我 國 人 口 老 齡 化 進程的加快，ＡＤ發(fā)病率呈不斷上升的趨勢，嚴重 威脅老年人的生命健康。ＡＤ 的發(fā)病機制十分復 雜，目前多方面研究表明，ＡＤ 患者大腦內(nèi)神經(jīng)遞 質(zhì)－乙酰膽堿的缺失是導致 ＡＤ 疾病的關(guān)鍵原因，AＤ的病理與患者神經(jīng)間隙中乙酰膽堿酯酶活性過高具有重要關(guān)系。

乙酰膽堿酯酶（ＡＣｈＥ，Ｓｉｇｍａ 公司），碘 化 乙 酰 硫 代 膽 堿 （ＡＴＣＩ，Ａｌａｄｄｉｎ 公 司），５，５’－二 硫 代 雙 （２－硝 基 苯 甲 酸）（ＤＴＮＢ， Ａｌａｄｄｉｎ公司），石杉 堿 甲（ｈｕｐｅｒｚｉｎｅＡ，Ａｌａｄｄｉｎ 公司），二甲基亞砜（ＤＭＳＯ，ＧＲ，天津市北聯(lián)精細 化學品開發(fā)有限公司），磷酸二氫鈉（ＡＲ，天津市 致遠化學試劑有限公司），磷酸氫二鈉（ＡＲ，天津 市致遠化學試劑有限公司），沒食子酸（ＡＲ，成都 市新都區(qū)木蘭鎮(zhèn)工業(yè)開發(fā)區(qū)），無水碳酸鈉（ＡＲ， 上海試四赫維化工有限公司），福林酚試劑（ＡＲ， 天津市光復精細化工研究所）；其余化學試劑均為 國產(chǎn)分析純，實驗用水為去離子水；薰衣草（由伊 犁紫蘇麗人有限責任公司提供，經(jīng)新疆分析測試 研究院阿依古麗副研究員鑒定確認）。

酶標儀Ｉ３Ｘ（ＭＤ 公司），制備 液相色譜儀（日本島津公司），碎樣機（北京開創(chuàng)同和科技發(fā)展有限公司），電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司），電熱恒溫水浴鍋（上海博迅實業(yè)有限公司），冷卻水循環(huán)機（萊博科泰公司），實驗 室冷凍干 燥 機（德 國 ＣＨＲＩＳＴ），分析 天 平（梅 特 勒－托利多），聯(lián)用型平行蒸發(fā)儀（ＢＵＣＨＩ），紫外分光光度計 ＵＶ－２７００（日本島津公司），超純水系 統(tǒng)（美國密理特公司），酶標板（Ｃｏｓｔａｒ公司）。

取薰衣草干花適 量，用碎樣機粉碎，過篩，保存?zhèn)溆谩７Q取 粉 碎 后 樣品于錐形瓶，加入７０％的乙醇（料液比１∶１０）， ８０℃回流提取１ｈ，過濾，重復提取２次，合并２次 濾液，減壓濃縮至無醇味，過聚酰胺柱，減壓濃縮 后凍干，稱重；將凍干的過完聚酰胺柱的組分溶解 后過 ＨＰ２０樹脂 柱，收 集 洗 脫 液，減 壓 濃 縮 后 凍 干，稱重，取該提取物加甲醇超聲溶解，進制備液 相，按時間收集，得３０個組分，減壓濃縮后凍干， 稱重；配置１ｍｇ·ｍＬ－１溶液，放于４℃冰箱保存?zhèn)?用，作為進行乙酰膽堿酯酶活性測定的樣品溶液。

標準曲 線制備：各取不同濃度的沒食子酸標準液０．５ｍＬ 于１０ｍＬ比色管中，加入５ｍＬ１０％的福林酚試 劑，加入３ｍＬ１０％碳酸鈉溶液，充 分 混 勻，室 溫 避光反應(yīng)９０ｍｉｎ；在７６５ｎｍ 處測定吸光度值，以 吸光度值（Ａ）為縱坐標，以濃度（Ｃ）為橫坐標，繪 制標準曲線。 樣品 測 定：取 待 測 樣 品 溶 液 ０．５ ｍＬ，加 入 ５ｍＬ１０％的福林酚試劑，加入３ｍＬ１０％碳酸鈉 溶液，混勻，室溫 避 光 反 應(yīng)９０ｍｉｎ；在７６５ｎｍ 處 測定吸光度值。

性研究 參 考 文 獻方 法，在 ９６ 孔 板 中 加 人１６０μＬ０．１ｍｏｌ·Ｌ－１ ＰＢ 緩沖 液（ｐＨ７．４），１０μＬ １Ｕ·ｍＬ－１ ＡＣｈＥ和１０μＬ待測樣品溶液（１ｍｇ·ｍＬ－１）， 混勻，４ ℃放置２０ｍｉｎ。加入１０μＬ１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＤＴＮＢ和１０μＬ１０ ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＡＴＣＩ，３７ ℃反應(yīng) ２０ｍｉｎ，用酶標儀測定４０５ｎｍ 處吸光度值。同時 設(shè)立背景對照組和空白對照組。按下式計算酶活性抑制率。

對３０個薰衣草提取物樣品測定多酚含量，結(jié) 果如表１。其中１３、１４、１５、１６號樣品多酚含量較 高，分別為６３．２０，５１．７２，４６．７９，８１．８２μｇ·ｍＬ－１； ５～１８號樣品多酚含量均大于２０μｇ·ｍＬ－１；其余 樣品多酚含量較低，均小于１２μｇ·ｍＬ－１。將３０個薰衣草樣品的多酚含量及酶 活 性 數(shù) 值進行比較，做相關(guān)性分析，可知多酚含 量的高低與乙酰膽堿酯酶抑制活性高低可能不存 在相關(guān)性。如圖中１６號樣品多酚含量最高，但其 乙酰膽堿酯酶抑制活性不是最高或最低，此 外， ６號樣品乙酰 膽 堿 酯 酶 抑 制 活 性 最 低，但 其 多 酚 含量為２８．１３μｇ·ｍＬ－１。由此 可 見，多 酚 不 是 薰 衣草提取物中抑制乙酰膽堿酯酶的主要活性物質(zhì)。

ＡＤ在我國 患 病 率 在６５歲以 上 的 老 年 人 口 中約 占 ５％，７５ 歲 以上的老年人口中上升為２０％，８５歲以上超過４５％，到２０４０年若仍找不到 有效的防治辦法，我國 ＡＤ病人將會達到９００萬， 尋找安全、高效、專一的治療 ＡＤ的天然藥物刻不容緩。目前市面上銷售的用于治療 ＡＤ的藥物包 括利斯的明、多奈哌齊等，對身體具有不同程度的 傷害。因此尋找高效、副作用小的天然乙酰膽 堿酯酶抑制活性產(chǎn)物對 ＡＤ 患者具有 重 要 意 義。 石杉堿甲是從中草藥蛇足石杉中分離到的一種強 乙酰膽堿酯酶抑制劑，本研究以石杉堿甲為陽性 對照對薰衣草提取物進行乙酰膽堿酯酶抑制活性 研究，發(fā)現(xiàn)部分薰衣草提取物對乙酰膽堿酯酶的 抑制作 用 十 分 顯 著，抑 制 率 高 達５０％～８０％，而 對于多酚含量的比較之后，可以發(fā)現(xiàn)，多酚不是薰 衣草提取物中抑制乙酰膽堿酯酶的主要活性物 質(zhì)，二者之間不存在相關(guān)性，這為 ＡＤ藥物的研發(fā) 提供了理論基礎(chǔ)和試驗依據(jù)。



 

免責聲明：文章僅供學習和交流，如涉及作品版權(quán)問題需要我方刪除，請聯(lián)系我們，我們會在第一時間進行處理。