原發性痛經系指非盆腔器質性病變引起的痛 經，以患者下腹部痙攣性疼痛為主要臨床表現。本 病多發于青年女性，國內報道其發病率約為 43% ~ 69%。國外流行病學調查顯示，原發性痛經的發病 率由 34%（埃及）至 94%（阿曼）不等，其中重度痛經 的患病率約為 0.9%~59.8%。隨著生活壓力增加、 飲食結構改變等因素的影響，原發性痛經的發病率 呈逐年上升趨勢，對女性的生活與工作造成了嚴重影響。

1 材料與方法

1.1 實驗儀器

NewClassic MF 電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司）；Xianou-24 高通量多樣品組織 研磨機 （南京先歐儀器制造有限公司）；Varioskan Lux 多 功 能 微 孔 板 讀 數 儀 （美 國 Thermo Fisher Scientific 公 司）；Wellwash 全 自 動 洗 板 機 （美 國 Thermo Fisher Scientific 公司）；BGZ-240 電熱鼓風干燥箱 （上海博迅實業有限公司醫療設備廠）； ProFlex Base PCR 系統 （美國 Applied Biosystems 公 司）；Milli -Q Integral 5 超 純 水 系 統 （美 國 Merck Millipore 公司）；Legend Micro 21R 冷凍高速離心機 （美國 Thermo Fisher Scientific 公司）。

1.2 實驗藥品與試劑

元胡止痛口服液的處方由 醋延胡索、白芷兩味中藥組成，輔料為蔗糖、β 環糊 精、甜菊素、純化水，由河南福森藥業有限公司提 供，批號：18090121，實驗時用蒸餾水稀釋成所需濃 度的溶液。羅通定片的有效成分為延胡索乙素（每 片 30 mg），購自山西云鵬制藥有限公司，批號： G180302，實驗時取出片劑研磨成細粉，加入蒸餾水 與 0.5%（W/V）羧甲基纖維素鈉，配制成所需濃度的 混懸液。己烯雌酚（上海源葉生物科技有限公司，批 號：X13M6Y1）；縮宮素（大連美侖生物技術有限公 司，批號：N1108A）；羧甲基纖維素鈉（上海申光食用 化學品有限公司，批號：20180816）；肝素鈉（北京索 萊寶科技有限公司，批號：409G024）；水合氯醛（上 海源葉生物科技有限公司，批號：Z23A9Y68668）。 E2 酶聯反應吸附實驗（ELISA）檢測試劑盒（批號： L181010239） 與 PGF2a ELISA 檢測試劑盒 （批號： L181023119） 購自武漢云克隆科技股份有限公司。 大鼠 Prog ELISA 檢測試劑盒 （批號：20181112005） 購自武漢六合生物技術有限公司。大鼠 PGE2 ELISA 檢測試劑盒（批號：C0174080121）、大鼠 TXB2 ELISA 檢測試劑盒 （批號：A27017483） 與大鼠 6-ketoPGF1α ELISA 檢測試劑盒（批號：D10017485）購自武 漢華美生物工程有限公司。MDA 檢測試劑盒（批號： 082418181030）、總 SOD 活性檢測試劑盒 （批號： 092618181030）、GSH -Px 檢 測 試 劑 盒 （ 批 號 ： 060518181114）、NO 檢 測 試 劑 盒 （ 批 號 ： 052218181029）與 BCA 蛋白濃度測定試劑盒（批號： 070618181017） 購自上海碧云天生物技術研究所。 Ca2+ 試劑盒（批號：20181123）購自南京建成生物工 程研究所。

1.3 實驗動物

SD 大鼠，雌性，體質量 180~200 g， SPF 級，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，合格證號：SCXK（京）2017-0001。飼養于中國醫學科學院放射醫學研究所實驗動物中心，飼養設施合 格證號：SVXK 津 2009-0002。實驗動物操作均遵從 中國醫學科學院放射醫學研究所實驗動物倫理委 員會審定的規范要求。

1.4 分組與造模方法

將 60 只健康雌性 SD 大鼠 按體質量隨機分為 6 組，分別為空白組、模型組、元 胡止痛口服液高劑量組（高劑量組）、元胡止痛口服 液中劑量組（中劑量組）、元胡止痛口服液低劑量組 （低劑量組）以及羅通定片陽性藥組（陽性藥組），每 組 10 只。參考文獻方法復制痛經大鼠模型。除空 白組外，其余各組大鼠灌胃給予己烯雌酚 2.00 mg/kg， 每日 1 次，連續 12 d。

1.5 給藥方法

于造模第 6 天開始給藥，根據預實 驗結果，高劑量組、中劑量組、低劑量組大鼠分別以 3.20、1.07、0.36 g/kg 劑量灌胃給予元胡止痛口服液。 根據實驗動物與人之間藥物劑量等效換算方法，陽 性藥組大鼠灌胃給予羅通定混懸液 0.03 g/kg。空白 對照組與模型組灌胃等體積蒸餾水，各組大鼠每日 給藥 1 次，連續給藥 7 d。

1.6 扭體反應觀察

于造模第 12 天，末次給藥 1 h 后，模型組、高劑量組、中劑量組、低劑量組與陽性 藥組大鼠腹腔注射縮宮素 40 U/kg，空白組注射等體 積生理鹽水。記錄注射縮宮素后 30 min 內各組大鼠 發生扭體反應（腹部收縮內凹，軀干與后肢伸展，臀 部與一側肢體內旋）的數量以及扭體次數，并按公 式 1 計算大鼠的扭體發生率。 扭體發生率（%）=發生扭體反應動物數量/實驗 動物數量×100%（公式 1）

1.7 檢測指標

注射縮宮素 1 h 后，各組大鼠腹腔 注射 3.50%（V/V）水合氯醛溶液（0.10 mL/kg）麻醉， 腹主動脈采血，加入肝素抗凝管，于 1 500 g，4 ℃條 件下離心 5 min，取上清液，采用 ELISA 法測定大鼠 血漿 E2 與 Prog 水平，采用 TBA 法檢測大鼠血漿 MDA 含量，運用 WST-8 法測定血漿 SOD 活性，并 采用紫外比色檢測 GSH-Px 活性。 另于采血后取大鼠子宮組織，精密稱質量，加 入生理鹽水，在冰浴下制成 10%（W/V）的組織勻漿， 于 1 500 g、4 ℃條件下離心 10 min，分離上清液，采 用ELISA 法測定大鼠子宮組織勻漿中 PGF2α、PGE2、 TXB2、6-keto-PGF1α 水平。采用甲基百里香酚藍比色 法測定組織勻漿中 Ca2+ 含量，運用 Griess 試劑法測 定 NO 含量，并采用 BCA 法測定大鼠組織勻漿總蛋 白含量。上述測定方法均按各試劑盒說明進行，實驗數據采用 ELISACalc 軟件進行分析，以四參數 Logistic 曲線模型擬合標準曲線，并通過標準曲線計 算各樣本濃度。

1.8 統計學方法

采用 SPSS 19.0 軟件進行統計分 析，實驗結果以均數±標準差（x±s）表示，正態分布資 料采用單因素方差分析比較多組間差異，偏態分布 資料采用 Wilcoxon 秩和檢驗分析，P<0.05 表示差異 有統計學意義。

2 結果

空白組大鼠未出現扭體反應， 模型組大鼠在注射縮宮素后 30 min 內的扭體發生 率為 90%，提示動物模型成功建立。與模型組相比， 陽性藥組、高劑量組、中劑量組、低劑量組大鼠扭體 發生率均有不同程度的降低，其中高劑量組與陽性 藥組大鼠扭體反應次數顯著減少，差異具有統計學 意義（P<0.05），詳見表 1。

與正常大鼠相比，原發性 痛經模型大鼠血漿 E2 水平顯著升高（P<0.01），血漿 Prog 水平顯著降低（P<0.05）。但陽性藥與元胡止痛 口服液給藥后，模型大鼠血漿 E2 與 Prog 水平均未 見顯著回調。見圖 1。

3 討論

原發性痛經的主要癥狀表現為周期發作的下 腹部痙攣性疼痛，縮宮素誘導的痛經動物模型是觀察原發性痛經疼痛程度的首選模型，而扭體反應則 是評價動物疼痛程度的經典行為學指標，目前在原 發性痛經的機制與防治研究中有廣泛應用。本研 究首先灌胃給予大鼠己烯雌酚以提高子宮敏感性， 之后注射縮宮素誘發子宮痙攣性收縮，觀察到模型 大鼠出現典型的扭體反應，與文獻報道一致，提示 痛經大鼠模型的成功建立。進一步研究發現，元胡 止痛口服液可顯著減少痛經大鼠扭體反應發生次 數，降低大鼠扭體反應發生率，提示元胡止痛口服 液對縮宮素誘導的痛經大鼠模型具有顯著的鎮痛作用。